暂时受到了削弱。
查理五世和弗朗西斯一世之间的公开冲突在1542年重新爆发,法奥合作也得以恢复。
1541年7月4日,法国驻奥斯曼帝国大使安东尼奥·林孔(Antonio Rincon)在经过意大利帕维亚(Pavia)附近时被帝国军队暗杀,导致了新的冲突爆发。
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在1542-1546年意大利战争期间,弗朗西斯一世和苏莱曼大帝再次与神圣罗马帝国皇帝查理五世以及英格兰国王亨利八世(Henry VIII)对峙。
战争期间,意大利、法国和低地国家(Low Countries)爆发了激烈的战斗,同时还尝试入侵西班牙和英格兰。
尽管这场冲突对主要参战国来说代价极其高昂,但结果并未有明确的胜负。
在地中海,应弗朗西斯一世的请求,两国在安托万·埃斯卡林·德·艾马尔(Antoine Escalin des Aimars,又名波林船长)转达后,积极进行海军合作,以对抗西班牙军队。
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